• 浅谈视黄酸诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的-论文摘要怎么写

浅谈视黄酸诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的-论文摘要怎么写wWw.7ctiMe.cOm

论文导读:

摘要:骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)具有取材方便、来源广泛、自体移植无免疫排斥性等优点而成为理想的移植细胞。成功诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞,对临床上治疗神经退行性疾病和中枢神经系统损伤修复具有重要作用。本探讨探讨体外分离培养、纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞的策略,对视黄酸(Retinoic Acid, RA)抑制骨髓间充质干细胞增殖,推动其向神经细胞分化及作用机制进行初步探讨。通过密度梯度离心培养法和完全贴壁培养法,分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,证实通过离体培养,可使体内环境下低丰度的BMSCs实现数目扩增,发现密度梯度离心法有利于BMSCs的纯化。不同浓度RA诱导BMSCs,加入碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)优化诱导条件,对其进行形态学观察,MTT法测定细胞存活率,确定RA最佳诱导浓度。RT-PCR及免疫细胞化学对诱导后的细胞进行鉴定,证实视黄酸诱导BMSCs分化为神经细胞,细胞表达神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(GAFP)和微管相关蛋白-2(MAP-2),同时发现bFGF可以显著提升BMSCs存活率和保护分化后的神经细胞,但是对于BMSCs的分化率无显著作用。RT-PCR检测RA诱导BMSCs历程中,RA受体RXRa的表达上调,证明RXRa参与RA诱导的BMSCs向神经细胞分化的历程。同时检测到在mRNA水平上转录因子Myocardin和MRTFA的表达升高,证明Myocardin和MRTFA也参与RA诱导的BMSCs向神经细胞分化的历程。利用Myocardin缺失转录激活域的真核表达质粒Myocardin△C,通过竞争性的抑制内源Myocardin的功能,探讨Myocardin在RA诱导BMSCs分化为神经细胞中的作用。结果发现,Myocardin功能缺失时,RA诱导效率显著降低,证明RA诱导BMSCs向神经细胞分化历程部分依赖转录因子Myocardin.RT-PCR检测细胞周期相关蛋白Cycpn-El和P21的表达情况。结果显示,在mRNA水平上,细胞周期蛋白cycpn-El的表达下降,P21的表达升高。证明在一定浓度范围内,RA能通过下调细胞周期蛋白Cycpn-El的表达,上调细胞周期抑制蛋白P21的表达,抑制BMSCs的增殖,推动其分化。 关键词:骨髓间充质干细胞论文 视黄酸论文 碱性成纤维生长因子论文 Myocardin论文 细胞周期论文 制约因子论文
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    摘要4-5

    ABSTRACT5-8

    1 前言8-25

    1.1 骨髓间充质干细胞介绍8-9

    1.1.1 骨髓间充质干细胞背景8

    1.1.2 骨髓间充质干细胞的生物学特点8-9

    1.1.3 骨髓间充质干细胞分离及培养策略9

    1.1.4 骨髓间充质干细胞的多向分化潜能9

    1.2 骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的探讨近况9-13

    1.2.1 骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的体内探讨9-11

    1.2.2 骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的体外探讨11-12

    1.2.3 骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的分子机制探讨进展12-13

    1.3 视黄酸介绍13-16

    1.3.1 视黄酸结构功能13

    1.3.2 视黄酸受体及其功能13-15

    1.3.3 视黄酸信号通路的探讨近况15-16

    1.4 碱性成纤维生长因子介绍16-18

    1.4.1 bFGF结构16

    1.4.2 bFGF的生物学功能16-17

    1.4.3 bFGF的信号通路探讨17

    1.4.4 bFGF对骨髓间充质干细胞具有促增殖作用17-18

    1.5 Myocardin家族介绍18-21

    1.5.1 Myocardin家族在体内表达方式18-19

    1.5.2 Myocardin家族的结构和功能19-20

    1.5.3 Myocardin家族的探讨进展20-21

    1.6 细胞周期制约因子介绍21-23

    1.6.1 细胞周期蛋白22

    1.6.2 细胞周期蛋白依赖性激酶22-23

    1.6.3 细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子23

    1.7 本论文的目的和作用23-24

    1.8 本论文探讨内容24-25

    2 材料与策略25-38

    2.1 实验材料25-27

    2.1.1 实验动物和质粒25

    2.1.2 实验仪器设备25

    2.1.3 主要试剂及耗材25-26

    2.1.4 常用溶液配制26-27

    2.2 实验策略27-38

    2.2.1 骨髓间充质干细胞的提取27-28

    2.2.2 骨髓间充质干细胞的体外扩增培养28-29

    2.2.3 骨髓间充质干细胞的冻存29

    2.2.4 骨髓间充质干细胞的的复苏29

    2.2.5 视黄酸诱导骨髓间充质干细胞的的分化29-31

    2.2.6 质粒的提取31

    2.2.7 琼脂糖凝胶电泳31-32

    2.2.8 免疫细胞化学检测法32-33

    2.2.9 RT-PCR检测视黄酸诱导骨髓间充质干细胞33-35

    2.2.10 FuGENE HD细胞转染策略35-37

    2.2.11 统计学处理策略37-38

    3 结果与讨论38-57

    3.1 骨髓间充质干细胞的分离培养纯化38-39

    3.2 骨髓间充质干细胞增殖能力的测定39-40

    3.3 RA诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞40-49

    3.3.1 RA诱导骨髓间充质干细胞形态学变化40-42

    3.3.2 MTT法检测RA诱导细胞的存活率42-44

    3.3.3 RT-PCR鉴定神经细胞标志基因44-46

    3.3.4 免疫细胞化学检测神经细胞标志蛋白的表达46-47

    3.3.5 RA诱导细胞的分化率47-49

    3.4 RT-PCR检测RA受体RXRα的表达49-50

    3.5 在mRNA水平检测Myocardin和MRTF-A的表达情况50-51

    3.6 内源性Myocardin功能的缺失抑制RA诱导骨髓间充质干细胞